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PCR产物酶消化结果的分析和表达。
发布时间:2019-05-09 点击:
PCR产物酶消化结果的分析和表达。
出处/作者:中国标准日期物质网:2014-10-2510:10:25
CaMV 35S启动子基因的扩增产物为195bp,可通过限制性内切核酸酶XmnI切成大小为80bp和115bp的两个片段。
具体步骤如下:将15μL回收的PCR产物放入酶切管中,加入1μl限制酶XmnI,加入2μl消化缓冲液,加入2μl。加入水以制备20μl反应体系,将温度在恒温水浴中保持在37℃并使其反应3小时。
将20μl反应混合物与上样缓冲液混合,并加入到含有2.5%琼脂糖凝胶的制备路线中,然后进行电泳检测和凝胶图像分析。
分析和呈现结果
1当通过样品PCR反应和OGM阳性对照获得CaMV 35S启动子,NOS终止子,CP4-EPSPS,CaMV 35S启动子和叶绿体转移肽基因片段(CaMV 35 S-CTP 4)时。扩增和扩增的片段与预期的片段一致,但只有凝集素9基因片段在阴性GMO对照中扩增而在空白对照中没有扩增的片段。样品为阳性,表明检测到CaMV 35 S. Gen启动子,NOS终止子基因,CaMV 35 S启动子,叶绿体转移肽基因片段(CaMV 35 S-CTP 4)和草甘膦抗性基因。
在样品PCR反应和GMO阳性对照中,CaMV 35S启动子和内标凝集素均被扩增,扩增片段与预期片段相同,而在GMO阴性对照中,只有凝集素被扩增。。在基因片段中,空白对照中没有扩增的片段。限制酶消化样品的CaMV 35S启动子的扩增片段可以将扩增的片段切割成80bp和115bp的两个片段,这表明样品是阳性结果。。
当在2个样品和GMO阴性对照的PCR反应中仅扩增凝集素基因片段时,在阳性对照中扩增CaMV 35S启动子,NOS终止子,CP4-EPSPS,CnMV35S-CTP4和凝集素。空白对照中没有扩增的片段。
该样品是阴性结果,并且发现未检测到CaMV 35S启动子,NOS终止子,CaMV 35S CTP 4和草甘膦抗性基因。
在样品和GMO阴性对照的PCR反应中,仅扩增片段中基因的片段,通过GMO阳性对照扩增CaMV 35 S启动子和凝集素基因,并且不存在扩增的片段。空白控制。
该样品证明是阴性结果,未检测到CaMV 35S启动子基因。
如果在样品PCR反应中未扩增3个凝集素基因片段,则GMO阳性对照和GMO阴性对照表明DNA模板制备的某些部分存在问题。关于PCR反应系统,有必要找出重新检测的原因。
除了凝集素基因的扩增之外,与负GMO对照的PCR反应具有其他扩增的外源基因,或者在空白对照中扩增产物片段,表明发生了污染。您需要找出检测过程以及原因。
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